loading . . . FOCUS PLATEFORME : Une expertise unique sur Paris-Saclay : Le tri de micro-organismes pathogĂšnes par cytomĂ©trie en flux Aujourdâhui, focus sur un nouvel Ă©quipement, et une expertise unique sur le territoire Paris-Saclay : Le tri de micro-organismes pathogĂšnes par cytomĂ©trie en flux ! Pour rappel, cette technique permet de mesurer, Ă©vĂšnement par Ă©vĂšnement, des caractĂ©ristiques morphologiques (taille, complexitĂ©/granularitĂ©) et de fluorescence sur une population de cellules ou dâorganites en suspension. Le tri par cytomĂ©trie en flux rend Ă©galement possible la sĂ©paration physique et donc la purification de ces Ă©vĂšnements suivant un ou plusieurs critĂšres dĂ©finis (morphologie, fluorescence) et Ă partir de populations hĂ©tĂ©rogĂšnes.
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Nouvel Ă©quipement et expertise unique sur Paris-Saclay ? LâĂ©coute et lâanticipation des besoins utilisateurs (dialogue, mais aussi via enquĂȘtes de satisfaction et de besoins) sur la plateforme de cytomĂ©trie de lâI2BC (I2BC / Plateforme de cytomĂ©trie (I2BC - plateformes IMAGERIE-GIF, Gif-sur-Yvette, CNRS/Institut Joliot CEA/UPSaclay) ont soulignĂ© une nĂ©cessitĂ© de rĂ©aliser des approches en cytomĂ©trie en flux dans des espaces L2. L'accĂšs Ă l'expertise et aux Ă©quipements pour rĂ©aliser de telles expĂ©riences est restreint dans le pĂ©rimĂštre de l'UniversitĂ© Paris-Saclay, et un rĂ©el besoin de prestations en environnement L2 a Ă©tĂ© identifiĂ©. Câest pour rĂ©pondre Ă ce besoin dâun accĂšs « facile » Ă un cytomĂštre de tri « user-friendly » permettant Ă lâutilisateur dâĂȘtre autonome et la nĂ©cessitĂ© de travailler en L2 pour les projets de tri de micro-organismes pathogĂšnes que la plateforme de cytomĂ©trie sâest Ă©quipĂ©e dâun CytoFLEX SRT (Beckman) en espace L2 dans lâI2BC. Ce nouveau trieur « de paillasse », financĂ© en partie par lâERM Paris-Saclay, est installĂ© sous PSM de type II dans un environnement L2 de lâI2BC, et dĂ©diĂ© aux micro-organismes pathogĂšnes. Sa configuration a Ă©tĂ© discutĂ©e pour assurer sa complĂ©mentaritĂ© et sa compatibilitĂ© avec lâanalyseur existant. Lâappareil est Ă©quipĂ© de 2 lasers (488 nm et 561 nm), de 7 dĂ©tecteurs de fluorescence (525/40 nm, 585/42 nm, 610/20 nm, 675/30 nm, 690/50 nm, 710/50 nm et 780/60 nm) et 2 dĂ©tecteurs de taille/granularitĂ©. Cette configuration permettra de lire un grand nombre de fluorochromes endogĂšnes (GFP, mCherry, dTomatoâŠ) et exogĂšnes (nombreux AlexaFluor, nombreux marqueurs dâacides nuclĂ©iques, âŠ) pour mieux identifier les cellules dâintĂ©rĂȘt, mĂȘme si elles sont rares. Une fois les cellules dâintĂ©rĂȘt identifiĂ©es, elles pourront ĂȘtre triĂ©es dans des tubes (le trieur bĂ©nĂ©ficie de 4 voies de tri en sortie) ou sur des plaques de 6 Ă 96 puits. Les bactĂ©ries triĂ©es pourront ĂȘtre remises en culture ou utilisĂ©es pour des expĂ©riences de biologie molĂ©culaire (RNAseQ, ChIPseQ, Hi-C, par exemple). Le CytoFLEX SRT permet de prĂ©parer une configuration de tri facile et automatisĂ©e, avec une mesure de contrĂŽle qualitĂ© assurĂ©e par des billes de fluorescence. Tous ces paramĂštres en font un trieur facile Ă utiliser en autonomie. LâĂ©quipement sera donc en accĂšs autonome aprĂšs formation par les ingĂ©nieurs de la plateforme (Karine Madiona et Mickael Bourge). NâhĂ©sitez pas Ă contacter la plateforme pour mettre au point vos expĂ©riences de tri qui pourront dĂ©buter au cours du 1er trimestre 2025.
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-> Contact : Mickael Bourge et Karine Madiona ([email protected])
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Plug In Labs Université Paris-Saclay : cliquer ICI
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La plateforme communique rĂ©guliĂšrement via des FOCUS PLATEFORME. Envie de les relire ? FOCUS PLATEFORME : Une expertise rare sur Paris-Saclay : La purification de cellules et dâorganites par la technique de tri par cytomĂ©trie en flux ; FOCUS PLATEFORME : Le tri cellulaire et le sĂ©quençage de cellule unique, une synergie pour mieux explorer la diversitĂ© cellulaire ! ; FOCUS PLATEFORME : La puissance statistique de la cytomĂ©trie au service de lâĂ©tude de flux ioniques intracellulaires en temps rĂ©el Â
I2BC / Plateforme de cytomĂ©trie (I2BC - plateformes IMAGERIE-GIF). La plateforme rĂ©alise environ 300 prestations par an pour divers groupes de recherche appartenant Ă diffĂ©rents organismes de tutelles ou de sociĂ©tĂ©s privĂ©es. Les publications du service traduisent les nombreuses collaborations dĂ©veloppĂ©es avec les diffĂ©rents instituts de la communautĂ© Paris-Saclay ainsi quâavec dâautres partenaires tels que lâINRAe, lâINSERM, lâIRD, le CIRAD, des universitĂ©s françaises et Ă©trangĂšres. Son expĂ©rience polyvalente et son expertise en sondes fluorescentes permettent dâadapter la cytomĂ©trie Ă des projets trĂšs divers issus de laboratoires publics et privĂ©s. Son partenariat avec SPS (Labex Saclay Plant Sciences) contribue Ă une activitĂ© importante dans le domaine de la biologie vĂ©gĂ©tale. La plateforme de cytomĂ©trie en flux propose la mesure de fluorescence d'un ou plusieurs (> 10) fluorochromes simultanĂ©ment, cellule par cellule. Cette technologie permet d'Ă©tudier: i) le dosage de la quantitĂ© dâADN nuclĂ©aire en vue de lâĂ©tude de cycles cellulaires et dâendorĂ©plication, ii) le dosage dâADN Ă des fins de recherche en Ă©cologie et systĂ©matique, et dâamĂ©lioration des variĂ©tĂ©s (analyse de ploĂŻdies), iii) le suivi de lâactivitĂ© gĂ©nique par lâexpression dâun ou plusieurs gĂšnes rapporteurs (tels que celui de la "Green Fluorescent Protein"-GFP et autres protĂ©ines fluorescentes), iv) des mesures dâactivitĂ©s mĂ©taboliques de la cellule (biosenseurs): dosage de calcium, pH, potentiel membranaire, poussĂ©es oxydatives, glutathion..., v) des analyses immunologiques, vi) le tri de cellules animales, de levures, de bactĂ©ries, de protoplastes et dâorganites cellulaires.
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A propos de lâInstitut de Biologie IntĂ©grative de la Cellule (I2BC - UMR 9198). LâI2BC est une UnitĂ© Mixte de Recherche (CEA, CNRS, UniversitĂ© Paris-Saclay), accueillant une soixantaine dâĂ©quipes de recherche et hĂ©bergeant 17 plateformes technologiques, rĂ©parties en 6 pĂŽles. 2025 est aussi une annĂ©e clĂ© pour lâI2BC : cette unitĂ© fĂȘte ses 10 ans cette annĂ©e. https://sco.lt/74TEbw